正就读中学的少年迈尔斯（沙梅克·摩尔 Shameik Moore 配音）意外被一只遭受放射性污染的蜘蛛咬伤，随后身体发生奇特的变化。偶然机缘，他目睹了蜘蛛侠（克里斯·派恩 Chris Pine 配音）和犯罪头目金并（列维·施瑞博尔 Liev Schreiber 配音）的战斗。为了阻止金并利用时空对撞机扰乱宇宙，蜘蛛侠最终壮烈牺牲。可未过多久，来自平行宇宙的颓废的彼德·帕克（杰克·约翰逊 Jake M. Johnson 配音）出现在迈尔斯面前。为了阻止金并的阴谋，并帮助这个帕克返回自己的宇宙，他们闯入金并的老巢。在这一过程中，二人遭到章鱼博士和徘徊者的狙击。与此同时，来自其他宇宙的女蜘蛛侠、暗影蜘蛛侠、蜘猪侠、二次元蜘蛛妹相继出现。
他们合力与恶势力展开斗争……

亚瑟·弗兰克是一个依靠扮演小丑赚取营生的普通人，患有精神疾病的他和母亲一同住在哥谭市的一座公寓里，幻想成为脱口秀演员的亚瑟为了这个目标而努力的生活着，但是现实却屡次击败他的梦想，亚瑟渐渐地变得越来越癫狂，某天在地铁上，亚瑟为了自保杀害了几名嘲笑他的人，同时，一个疯狂的想法在亚瑟心灵萌发…… 在看似和平的哥谭市，即将发生翻天覆地的巨变。