《吸血鬼骑士》根据由漫画家樋野茉理所绘画的同名少女漫画所改编。
黑主学院是一所有名的私立学校，分为普通部和夜间部。夜间部人员都是有超美型的精英学员。但他们有个特殊的身份：吸血鬼！并且这个身份不能让普通部学生知道。理事长的义女——普通部学生的黑主优姬，以及青梅竹马的锥生零担负起学院守护者的职责——处理人类学生与吸血鬼接触时所出现的麻烦。而在零的内心深处，因为4年前父母被杀害而痛恨着所有吸血鬼。
十年前的一个雪夜优姬迷路遭遇恶鬼，幸得贵族吸血鬼玖兰枢所救。十年后，两人在黑主学院再次相遇。对于救过自己性命的枢，优姬心中存着感激与仰慕，枢虽对优姬有好感，但却因种族间的鸿沟刻意远离。而零虽对优姬也有感觉，但坚硬的内心却阻止了他的感情。等待着他们的命运到底是什么......

木幡真琴（篠田南 配音）是一名见习魔女，同时亦是一名十五岁的高中一年级女生。魔女界有一个约定俗成的规矩，那就是在十五岁成人礼之后，魔女们便要走上社会开始独自生活，进行魔女的修行。如此，真琴孤身一人来到了青森县，居住在堂兄仓本圭（菅原慎介 配音）家中，转入了这里的高中，开始了崭新的生活。
在这里，真琴结识了许多善良的朋友们，天真可爱对魔女稍稍有些害怕的仓木千夏（铃木绘里 配音）、家中经营着酒铺的石渡直（三上枝织 配音）、误食了魔法药而在白天会变成狗面的犬养（日野麻里 配音）、和母亲与幽灵雏（金元寿子 配音）一起经营咖啡店的椎名杏子（井口裕香 配音）。在这些朋友们的陪伴下，有笑有泪的剧目拉开了序幕。