他是蝙蝠侠最不共戴天的宿敌，是丧心病狂的犯罪大师，他怪异的狂暴行径就连世界最佳侦探也琢磨不透。然而小丑并非天生如此。在他成为犯罪界的小丑王子之前，在那命定的一天将他面容尽毁、心灵永久扭曲之前，他也曾是黑暗骑士愿意献出生命去保护的对象——一个平凡人 。
是什么导致了这个平凡公民堕落成了哥谭有史以来最强反派？蝙蝠侠能阻止小丑把戈登局长和他的女儿芭芭拉拖入疯狂深渊的计划吗？这对死敌能及时为他们之间无尽的对决画下一个句号吗？

罪恶丛生的哥谭市，疯狂的小丑（扎克·加利凡纳基斯 Zach Galifianakis 配音）带领恶棍军团展开新一波的犯罪活动。对他来说，犯罪以及引来宿敌蝙蝠侠（威尔·阿奈特 Will Arnett 配音）是无比快乐的事情，可是猛男蝙蝠侠不仅轻松解决掉这群小坏蛋，还根本不将小丑放在眼里。蝙蝠侠的无情言语，深深刺痛了小丑的心。在此之后，孤独的蝙蝠侠收养了罗宾（迈克尔·塞拉 Michael Cera 配音），看上了美丽的女警长芭芭拉，只不过他始终拒绝别人走入他的内心世界。
另一方面，自尊严重受挫的小丑从天空监狱找来了霸王龙、迅猛龙、索伦、伏地魔、金刚等史上著名的大坏蛋，他要狠狠地打击自高自大的蝙蝠侠……